食品卫生微生物学检验

　　大 肠 菌 群测定

　　范围

　　本标准规定了食品中大肠菌群的侧定方法。

　　本标准适用于各类食品中大肠菌群的测定。

　　2 规范性引用文件

　　下 列 文 件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

　　的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

　　是否可使用这些文件的最新版本‘凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准，

　　GB /T 4 789.2 8-2003 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂

　　术语和定义

　　下 列 术 语和定义适用于本标准。

　　3. 1

　　大肠 菌 群 Colijormb acteria

　　一 群 能 发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来源于人畜粪

　　便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。

　　食 品 中 大肠菌群数系以100m L(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。

　　4 设备和材料

　　冰箱:OC-4C。

　　恒温培养箱:36℃士1C ,

　　恒温水浴锅:46℃士1C。

　　显微镜:lox一loo x。

　　均质器或灭菌乳钵。

　　架盘药物天平:0g -500g >精确至0.5 g ,

　　灭菌吸管1m l,(具0.0 1m L刻度),10m l,(具0.1 m l,刻度)。

　　灭菌锥形瓶:500 mL,

　　灭菌玻璃珠:直径约5 mm,

　　灭菌培养皿:直径90 mm,

　　灭 菌试管:16m mX 160m m,

　　灭菌刀、剪子、镊子等。

　　5 培养签和试荆

　　5.1 乳搪胆盐发酵管:按GB/T 4789. 28-2003中4.9规定。

　　5.2 伊红美蓝琼脂平板:按GB/T 4789. 28-2003中4.25规定。

　　5.3 乳搪发酵管:按GB/T 4789. 28-2003中4.10规定。

　　GB/T 4789. 3-2003

　　5.4 EC肉汤:按GB/T 4789.2 8-2003中4.11规定。

　　5.5 磷酸盐缓冲液:按GB/T 4789. 28-2003中3.22规定。

　　5.6 0.85%灭菌生理盐水。

　　5.7 革兰氏染色液:按GB/T 4789. 28-2003中2.2规定。

　　6 检验程序

　　大肠菌群检验程序见图1,

　　7 操作步驭

　　7.1 检样稀释

　　7.1.1 以无菌操作将检样25 g(mL)放于含有225 mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内

　　(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1，10的均匀稀释液。固体检样

　　最好用均质器，以8 000 r/min-10 000 r/min的速度处理1 min，做成1，10的均匀稀释液。

　　7.1.2 用1 mL灭菌吸管吸取1，10稀释液1 mL，注人含有9 mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管

　　内，振摇试管混匀，做成1，100的稀释液。

　　7.1.3 另取1 mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1 mL灭

　　菌吸管。

　　7.1.4 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度，接种三管。

　　7.2 乳箱发酵试验

　　将 待 检 样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1m L以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1m L及

　　1 mL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种三管，置36℃ 士11C温箱内，培养24 h士2h，如

　　所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。

　　7.3 分离培养

　　将 产 气 的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36℃士10C温箱内，培养18h --24h ，然后取

　　出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。

　　7.4 证实试验

　　在 上 述 平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1个一2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置

　　36℃士1℃培养箱内培养24 h士2h，观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，

　　即可报告为大肠菌群阳性。

　　7.5 报告

　　根 据 证 实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每l00mL(g)大肠菌群的MPN值。

　　8 粪大肠菌群(Faecal coliform)

　　8.1 用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物(见7.2)转种于EC肉汤管内，置44.5℃士0.2 0C

　　水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面)，培养24 h士2h，经培养后，如所有EC肉汤管均不产

　　气，则可报告为阴性;如有产气者，则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上，置培养

　　18 h-24 h，凡平板上有典型菌落者，则证实为粪大肠菌群阳性。

　　8.2 结果报告

　　根 据 证 实为粪大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告每100m L(g)粪大肠菌群的MPN值(见

　　表1),